【产品名称】GC-9280脂肪酸分析气相色谱仪
【执行标准】GB 5009.168-2016 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定
GB 5413.27-2010 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定
【应用原理】
1 水解-提取法:试样经水解-y醚溶液提取其中的脂肪后,在碱性条件下皂化和甲酯化,生成脂肪酸甲酯,经毛细管柱气相色谱分析,外标法定量测定脂肪酸的含量。动植物纯油脂试样不经脂肪提取,直接进行皂化和脂肪酸甲酯化
2 乙酰氯-甲醇法(适用于含水量小于5%的乳粉和无水奶油试样):乙酰氯与甲醇反应得到的盐酸-甲醇使其中的脂肪和游离脂肪酸甲酯化,用甲苯提取后,经气相色谱仪分离检测,外标法定量。
酯交换法(适用于游离脂肪酸含量不大于2%的油脂):将油脂溶解在异辛烷中,加入氢氧化钾甲醇溶液通过酯交换甲酯化,反应*后,用硫酸氢钠中和剩余氢氧化钾,外标法定量测定脂肪酸的含量。
【试剂和材料】
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的一级水。
1 试剂
1.1 盐酸(HCl)。
1.2 氨水(NH3·H2O)。
1.3 焦性没食子酸(C6H6O3)。
1.4 y醚(C4H10O)。
1.5 石油醚:沸程30℃~60℃。
1.6 乙醇(C2H6O)(95%)。
1.7 甲醇(CH3OH):色谱纯。
1.8 氢氧化钠(NaOH)。
1.9 正庚烷[CH3(CH2)5CH3]:色谱纯。
1.10 sf化硼甲醇溶液,浓度为15%。
1.12 氯化钠(NaCl)。
2 试剂配制
2.1 盐酸溶液(8.3mol/L):量取250mL盐酸,用110mL水稀释,混匀,室温下可放置2个月。
2.2 y醚-石油醚混合液(1+1):取等体积的y醚和石油醚,混匀备用。
2.3 氢氧化钠甲醇溶液(2%):取2g氢氧化钠溶解在100mL甲醇中,混匀。2.4 饱和氯化钠溶液:称取360g氯化钠溶解于1.0L水中,搅拌溶解,澄清备用。
2.5 氢氧化钾甲醇溶液(2mol/L):将13.1g氢氧化钾溶于100mL无水甲醇中,可轻微加热,加入无干燥,过滤,即得澄清溶液。
3 标准品
3.1 十一碳酸甘油三酯(C36H68O6,CAS号:13552-80-2)。
3.2 混合脂肪酸甲酯标准品。
3.3 单个脂肪酸甲酯标准品:见附录A。
4 标准溶液配制
4.1 十一碳酸甘油三酯内标溶液(5.00mg/mL):准确称取2.5g(至0.1mg)十一碳酸甘油三酯至烧杯中,加入甲醇溶解,移入500mL容量瓶后用甲醇定容,在冰箱中冷藏可保存1个月。
4.2 混合脂肪酸甲酯标准溶液:取出适量脂肪酸甲酯混合标准移至到10mL容量瓶中,用正庚烷稀释定容,贮存于-10℃以下冰箱,有效期3个月。
4.3 单个脂肪酸甲酯标准溶液:将单个脂肪酸甲酯分别从安瓿瓶中取出转移到10mL容量瓶中,用正庚烷冲洗安瓿瓶,再用正庚烷定容,分别得到不同脂肪酸甲酯的单标溶液,贮存于-10 ℃以下冰箱,有效期3个月。
【仪器配置清单】
1.匀浆机或实验室用组织粉碎机或研磨机。
2.气相色谱仪:GC-9280具有氢火焰离子检测器(FID)+毛细管进样口。
自动进样器：液体自动进样装置
色谱工作站：反控版
气体发生器：氮氢空一体机
3.毛细管色谱柱:聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相,柱长100m,内径0.25mm,膜厚0.2μm。
4.恒温水浴:控温范围40℃~100℃,控温±1℃。
5.分析天平:感量0.1mg。
6.旋转蒸发仪。
【脂肪酸测定方法】
1.色谱参考条件
取单个脂肪酸甲酯标准溶液和脂肪酸甲酯混合标准溶液分别注入气相色谱仪,对色谱峰进行定性。
脂肪酸甲酯混合标准溶液气相色谱图,见附录B。
a) 毛细管色谱柱:聚二氰丙基硅氧烷强极性固定相,柱长100m,内径0.25mm,膜厚0.2μm。
b)进样器温度:270℃。
c) 检测器温度:280℃。
d) 程序升温:初始温度100℃,持续13min;
100℃~180℃,升温速率10℃/min,保持6min;
180℃~200℃,升温速率1℃/min,保持20min;
200℃~230℃,升温速率4℃/min,保持10.5min。
e) 载气:氮气。
f) 分流比:100∶1。
g) 进样体积:1.0μL。
h) 检测条件应满足理论塔板数(n)至少2000/m,分离度(R)至少1.25。
2.试样测定
试样溶液的测定
3.在上述色谱条件下将脂肪酸标准测定液及试样测定液分别注入气相色谱仪,以色谱峰峰面积定量。
脂肪的皂化和脂肪酸的甲酯化
在脂肪提取物中加入2%氢氧化钠甲醇溶液8mL,连接回流冷凝器,80℃±1℃水浴上回流,直至油滴消失。从回流冷凝器上端加入7mL15%三f化硼甲醇溶液,在80 ℃±1 ℃水浴中继续回流2min。用少量水冲洗回流冷凝器。停止加热,从水浴上取下烧瓶,迅速冷却至室温。准确加入10mL~30mL正庚烷,振摇2min,再加入饱和氯化钠水溶液,静置分层。吸取上层正庚烷提取溶液大约5mL,至25mL试管中,加入大约3g~5g,振摇1min,静置5min,吸取上层溶液到进样瓶中待测定